K599 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 - 上海...

来自 : www.maokangbio.com/productVi.. 发布时间：2021-03-25

发根农杆菌（Agrobacteriumrhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上于Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。
发根农杆菌菌株K599（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。
我司（懋康生物）提供的K599化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR) pRi2659 (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率 103cfu/μg DNA。 保存与运输条件： 保存：-80℃保存，一年有效。 运输：干冰运输。 注意事项 1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。 2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。 3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 4） 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。 5） 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。 6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。 7） K599具有链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。 8） 为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。 9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 1)取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。 2)往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中间静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。 3)冰浴中拿出放室温，加入700μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2h。 4)6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
附表1 固体和液体TY培养基配方 附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表
Ar A4 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl MF2459-1000UL Ar Qual Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl MF...懋康生物，生物科技，生化试剂，抗体，耗材，特美汀，金担子素A ，潮霉素B，草铵膦，杀稻瘟菌素，嘌呤霉素，硫酸诺尔斯菌素，D-荧光素，雷帕霉素，独脚金内酯，果胶酶Y-23，纤维素酶R-10上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持“品质保障”的原则为广大客户提供优质产品。K599 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞